實(shí)驗(yàn)原理
早期的shRNA載體多采用RNA聚合酶III型啟動(dòng)子介導(dǎo)shRNA的表達(dá)，RNA聚合酶III型啟動(dòng)子如鼠源的U6啟動(dòng)子和人源的H1啟動(dòng)子可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)小分子RNA。隨著miRNA干擾機(jī)制的深入研究，發(fā)展出第二代siRNA載體，即采用RNA聚合酶II型啟動(dòng)子CMV表達(dá)含側(cè)翼序列的miRNA模擬物（見圖2.2）。該載體模擬miRNA的加工，表達(dá)出來的shRNA進(jìn)入RISC沉默復(fù)合物的效率要比RNA聚合酶III型啟動(dòng)子表達(dá)的shRNA高倍十倍，抑制效率更好，且可以和EGP協(xié)調(diào)表達(dá)，方便觀察轉(zhuǎn)染效率。
實(shí)驗(yàn)流程
結(jié)果展示
