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Chromatin immunocoprecipitation
染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)

實驗原理

將ChIP與第二代測序技術(shù)相結(jié)合的ChIP-Seq技術(shù),能夠高效地在全基因組范圍內(nèi)檢測與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段。ChIP-Seq的原理是:首先通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段,并對其進行純化與文庫構(gòu)建;然后對富集得到的DNA片段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數(shù)百萬條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上,從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段信息。

圖片17-染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù).png


實驗流程

(1)甲醛交聯(lián)整個細(xì)胞系(組織),將目標(biāo)蛋白與染色質(zhì)連結(jié)起來;

(2)分離基因組DNA,并用超聲波將其打斷成一定長度的小片段;

(3)添加與目標(biāo)蛋白質(zhì)特異的抗體,該抗體與目標(biāo)蛋白形成免疫沉淀免疫結(jié)合復(fù)合體;

(4)去交聯(lián),純化DNA即得到染色質(zhì)免疫沉淀的DNA樣本;

(5)將準(zhǔn)備好的樣本進行深度測序。


結(jié)果展示

圖片18-染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù).png

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